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透射熒光顯微鏡與反射熒光顯微鏡的區別及優缺點
發布時間: 2022-03-08  點擊次數: 905次

透射熒光(guang)顯微鏡與反射熒光(guang)顯微鏡的區別(bie)及優缺點

        1、透射熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)(jing):激(ji)發光(guang)源通過聚光(guang)鏡(jing)(jing)穿(chuan)過試(shi)樣材料激(ji)發熒(ying)光(guang)。常(chang)用暗場聚光(guang)器(qi),也可使(shi)用普通聚光(guang)器(qi),調節反射鏡(jing)(jing)使(shi)激(ji)發光(guang)向試(shi)樣轉移和側(ce)射。這是一種(zhong)相(xiang)對老式的(de)(de)熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)(jing)。優(you)點是在(zai)低(di)倍率下熒(ying)光(guang)強,但缺(que)點是隨著倍率的(de)(de)增加(jia)熒(ying)光(guang)減弱。因此,最(zui)好觀察較大的(de)(de)試(shi)樣材料。
         2、落射熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡(jing)(jing):這(zhe)是(shi)現代(dai)發(fa)展起(qi)來的(de)(de)(de)一種(zhong)(zhong)新型熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡(jing)(jing)。不同(tong)(tong)(tong)之處在(zai)(zai)于激(ji)(ji)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)從物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)下落到試樣(yang)表(biao)面,即照明聚光(guang)(guang)(guang)(guang)器(qi)和收(shou)集熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)的(de)(de)(de)物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)使(shi)用(yong)同(tong)(tong)(tong)一個物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)。需要(yao)在(zai)(zai)與(yu)光(guang)(guang)(guang)(guang)學(xue)鈾成(cheng) 45 度角的(de)(de)(de)光(guang)(guang)(guang)(guang)路中(zhong)添加二(er)色分束(shu)器(qi)。激(ji)(ji)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)被(bei)反射到物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)中(zhong)并集中(zhong)在(zai)(zai)樣(yang)品上。樣(yang)品產生的(de)(de)(de)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)被(bei)物(wu)(wu)鏡(jing)(jing)表(biao)面和蓋(gai)玻片表(biao)面反射。同(tong)(tong)(tong)時(shi),激(ji)(ji)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)進(jin)入物(wu)(wu)鏡(jing)(jing),返回二(er)向色分光(guang)(guang)(guang)(guang)鏡(jing)(jing),使(shi)激(ji)(ji)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)和熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)分離,剩余激(ji)(ji)發(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)被(bei)阻擋(dang)濾(lv)光(guang)(guang)(guang)(guang)片吸收(shou)。例(li)如,可以使(shi)用(yong)不同(tong)(tong)(tong)的(de)(de)(de)激(ji)(ji)發(fa)濾(lv)光(guang)(guang)(guang)(guang)片/雙(shuang)色分光(guang)(guang)(guang)(guang)鏡(jing)(jing)/阻擋(dang)濾(lv)光(guang)(guang)(guang)(guang)片的(de)(de)(de)組合來滿足不同(tong)(tong)(tong)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)反應產物(wu)(wu)的(de)(de)(de)需要(yao)。這(zhe)種(zhong)(zhong)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡(jing)(jing)的(de)(de)(de)優點是(shi)視野(ye)均(jun)勻,成(cheng)像清晰,放大倍數越大,熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)越強。
        透(tou)射熒光顯微鏡的優(you)缺點
        光源:高(gao)壓汞燈或鹵素燈。
        聚(ju)光(guang)鏡(jing):使用暗場聚(ju)光(guang)鏡(jing)來分(fen)離激發光(guang)和熒光(guang)。
        目標:可以使用任(ren)何類型的目標。
        標(biao)本(ben):因為是透射觀(guan)察,薄標(biao)本(ben)比較適(shi)合。
        優點:①由于使用了暗場聚光(guang)鏡,激發光(guang)不能進入物鏡,因此容(rong)易形成暗背景并獲得(de)良(liang)好(hao)的(de)對比度,任(ren)何物鏡都(dou)可以(yi)進行觀察(cha)。 ② 使用低倍物鏡時,比反射熒光(guang)顯微鏡更亮。
        缺點(dian):聚光(guang)(guang)鏡的(de)中心和高(gao)度必須調(diao)整正確,否(fou)則(ze)無法獲得(de)明亮的(de)熒光(guang)(guang)圖像。由于(yu)暗場(chang)聚光(guang)(guang)鏡的(de)焦距限制,不(bu)能使用(yong)厚(hou)載玻(bo)片。視(shi)場(chang)的(de)照明面積(ji)不(bu)宜過大,否(fou)則(ze)熒光(guang)(guang)標本的(de)熒光(guang)(guang)顏(yan)色很容易褪色。不(bu)適用(yong)于(yu)厚(hou)的(de)或不(bu)透明的(de)樣品(pin)。
        反射熒光(guang)顯微鏡的優缺點(dian)
        光源:高(gao)壓(ya)汞燈或鹵素燈。
        聚光(guang)鏡:由于物鏡充當聚光(guang)鏡,因此不(bu)需要聚光(guang)鏡。
        事物(wu)(wu)鏡子:使用的物(wu)(wu)鏡必須透(tou)過足夠的紫外(wai)光,本身(shen)不產生(sheng)熒光,對數值孔徑沒有限制。
        標(biao)本(ben):可以觀察到(dao)厚標(biao)本(ben)或(huo)不透明標(biao)本(ben)。
        優(you)點:①由于物鏡兼(jian)作聚光(guang)鏡,無需進行(xing)多次調整(zheng)。 ②孔徑光(guang)闌和(he)視場(chang)光(guang)闌的(de)效(xiao)果(guo)可以通過使用Korra照明法來發揮。 ③物鏡的(de)數值孔徑不受限制,在高倍率(lv)下也(ye)(ye)可以獲得高分(fen)(fen)辨率(lv)的(de)圖像。 ④也(ye)(ye)可以觀察厚(hou)或不透明的(de)標本,也(ye)(ye)可以使用厚(hou)蓋玻片。 ⑤其他(ta)觀察方法也(ye)(ye)可與反射熒(ying)光(guang)結(jie)合使用,特別是與相差法和(he)透射微分(fen)(fen)干(gan)涉差法結(jie)合使用。 ⑥可避免(mian)不必要(yao)的(de)熒(ying)光(guang)褪色現(xian)象。
        缺點:使用(yong)地(di)倍率物(wu)鏡時,成(cheng)像比較暗,必須使用(yong)數值孔徑大(da)的物(wu)鏡。濾光(guang)片系統(tong)必須有效地(di)分離激發光(guang)和熒光(guang)。

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